1. Подбор красителя.

2. Тест на восприимчивость препарата.

3. Предварительное мытье.

4. Нанесение красителя.

5. Время выдержки.

6. Смывание красителя.

7. Уход за окрашенными волосами.

1. Подбор красителя зависит от состояния волос, степени их повреждения.

2. Тест на восприимчивость препарата к данному виду красителя выполняется с внутренней стороны изгиба руки или за ушной раковиной. Для этого наносится небольшое количество препарата на сухую кожу. Если через 24 часа кожа не покраснела, значит она воспринимает препарат.

3. Перед окраской волос 1-й и 2-й групп их не моют. Если волосы перед окраской все-таки излишне загрязнены, можно вымыть их один раз, не затрагивая кожу, чтобы не повредить ее естественную защиту.

4. Нанесение красителя. Перед тем как приступить к окраске волос, необходимо соблюдать правила техники безопасности с препаратами для окраски волос: защитить одежду пеньюаром, работать в перчатках, инструменты не должны иметь металлических частей, так как при взаимодействии красителя с металлом появляются нежелательные металлические соединения, отрицательно действующие на волосы и на качество красителя.

Кожу по краевой линии роста волос необходимо смазать защитным кремом – это предохранит ее от раздражения и от окрашивания красителем. Смешивать краску следует перед самым употреблением, так как процесс окисления начинается сразу же при смешивании и интенсивность цвета ослабевает.

Рис. 134. Нанесение красителя

5. Время выдержки. Очень важно соблюдать время выдержки. Его отсчет начинается после полного нанесения красителя. При нормальной окраске окислительным красителем воздействие должно быть не менее 30 минут, при осветлении – не менее 50 минут, в противном случае краситель не проявится полностью и не будет устойчив на волосах.

Дополнительное тепло применяется при использовании не всех красителей и никогда не используется при тонировании пастельными оттенками.

Рис. 135. Использование дополнительного тепла уменьшает время окраски

За счет использования дополнительного тепла время выдержки уменьшается на 1/3.

Особой осторожности требует окраска волос, подвергшихся химической завивке. Они более пористые и поэтому очень быстро усваивают краситель. Окрашивать их следует через неделю после завивки, а процесс окрашивания сократить на 5-10 минут.

Рис. 136. Перед смыванием красителя нужно вспенить его в небольшом количестве воды

6. Смывание красителя. Перед смыванием красителя с волос необходимо произвести контроль, чтобы убедиться в однородности цвета корней волос и концов. Для этого нужно сдвинуть обушком расчески краску с корневой части, затем с концов и сравнить их. Так же производится контроль за участками седых волос, и если обнаружится, что седина еще не прокрасилась, время выдержки красителя следует удлинить.

7. Уход за окрашенными волосами. После окраски нужно обязательно дать клиенту рекомендации по правильному уходу за окрашенными волосами, иначе краска может быстро смыться и поблекнуть, и клиент ошибочно припишет это плохой работе парикмахера или низкому качеству красителя.

После окрашивания обязательно нужно пользоваться специальными шампунями и бальзамами.

Методы окраски

4. Промыть водой

Механизм и этапы окраски по Цилю-Нельсону

1. На фиксированный мазок нанести карболовый р-р фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течении 3-5 мин

2. Снять бумагу, провыть мазок водой

3. Нанести 5% р-р серной кислоты или 3% р-р смеси спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин для обесцвечивания.

4. Промыть водой

5. Докрасить мазок водным р-ом метиленового синего в течении 3-5 мин

6. Промыть водой, высушить и микроскопировать

* Некислоустойчивые – обесцвечиваются и окр. метиленовым синим в голубой цвет, а кислоустойчивые остаются окрашенными фуксином в красный.

Метод Ожешко

Относится к сложным методам окраски и используется для выявления спор бактерий.

Этапы окраски:

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогреть в течение 2-3 мин на пламени (для протравливания плотной оболочки споры) до полного испарения кислоты.

2. Высушить и зафиксировать мазок в пламени горелки.

3. Окрасить по методу Циля-Нильсена.

Споры бактерий будут окрашиваться в красный цвет (как кислотоустойчивые бактерии), а вегетативные формы в синий цвет (как некислотоустойчивые бактерии).

Окраска по Гиссу

Техника. Препарат, фиксированный любым спосо­бом, кроме жара, красят 5% водным раствором генцианового фиолетового, подогревая до появления паров. Мазок промывают 20% водным раствором медного купороса и сушат.

Микроскопическая картина. Бактерии и капсулы окрашиваются в фиолетовый цвет различной интенсивности.

Требования предъявляемые к петельным средам

Готовые питательные среды должны:

1. удовлетворять потребностям обмена веществ микробной клетки;

2. легко усваиваться бактериями;

4. быть стерильными;

5. иметь оптимальную рН;

6. иметь достаточную влажность (плотная среда должна иметь не меньше 60% влаги);

Классификация питательных сред

По составу питательные среды подразделяются на естественные, искусственные и синтетические.

Естественные среды состоят из натуральных продуктов животного или растительного происхождения. Основой таких сред являются молоко, яйца, овощи, животные ткани, желчь, сыворотка крови. На естественных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, так как в таких средах имеются все компоненты для их роста и размножения.

Синтетические среды – это такие среды, в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды могут иметь большой набор компонентов, но могут быть и простыми по составу. Эти среды удобны для исследования обмена веществ микроорганизмов. Зная точный состав и количество входящих в среду компонентов, можно изучить их потребление и превращения в соответствующие продукты обмена.

По консистенции среды бывают жидкие, полужидкие, плотные, сыпучие и сухие.

Жидкие среды применяют для изучения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы или продуктов обмена микроорганизмов. Примером наиболее часто применяемой жидкой питательной среды является мясо-пептонный бульон (МПБ).

Для его приготовления сначала готовят мясной отвар. С этой целью свежее мясо (говядину, телятину) освобождают от костей и сухожилий, пропускают через мясорубку. 500 г такого фарша заливают 1 л водопроводной воды и оставляют на 24 часа для экстрагирования необходимых для питания микроорганизмов веществ. Затем мясо отжимают через марлю и полученный настой кипятят в течение 30 минут для свёртывания белка, который отделяют фильтрованием. Отфильтрованный настой стерилизуют. Стерильная мясная вода является основой для приготовления мясо-пептонного бульона. Для этого к 1 л мясной воды добавляют 10 г пептона и 5 г NaCl. Пептоны добавляют взамен свернувшегося белка. Они являются продуктами неполного разрушения белка, получаемыми кислотным или ферментативным гидролизом мяса или молочного казеина. Преимуществом этих источников аминокислот является то, что они легко усваиваются и при стерилизации не свёртываются. Поэтому стерильный бульон остаётся прозрачным.

Рост микроорганизмов в таких средах легко отмечается визуально по появлению мутности. МПБ – богатая питательная среда, но в ней мало углеводов.

Плотные среды необходимы для выделения и изучения свойств чистых культур микроорганизмов, так как на них можно получить изолированный рост отдельных клеток. Плотные питательные среды (мясо-пептонный агар (МПА)) готовят из жидких посредством добавления к ним агар-агара. Агар-агар (по малайски – желе) получают из водорослей. Это сложный полисахарид, который образует гель с точкой плавления 96 – 100 ºС и температурой застывания 40 ºС. Несколько циклов плавления и затвердевания не влияют на способность агара образовывать гель, поэтому агаровые среды можно несколько раз стерилизовать.

Плотные питательные среды получают, добавляя к жидким 1-2% агар-агара. Среду с внесённым в неё агаром нагревают на водяной бане до расплавления последнего. Полученный горячий раствор фильтруют через гигроскопическую вату и разливают по чашкам Петри и пробиркам.

Сухие питательные среды изготовляются в виде сухих порошков, которые хорошо растворяются в воде при комнатной температуре. Преимущество таких сред в их стандартности, стабильности, простоте приготовления и удобстве при транспортировке. Сухие питательные среды представляют собой гигроскопические порошки, хранящиеся в специальных флаконах. В лаборатории из порошков готовят соответствующие питательные среды по прописи указанной на этикетке. Чаще всего применяют сухой питательный агар, среду Эндо.

По назначению среды подразделяются на обычные (простые), специальные, элективные, дифференциально-диагностические.

Обычные (простые) среды используют для культивирования большинства микроорганизмов. Это мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА).

Специальные среды – это среды, предназначенные для выявления тех или иных микроорганизмов или получения культуры микроорганизмов, обладающих особыми свойствами.

Среди специальных сред различают:

1. элективные (избирательные)

2. дифференциально-диагностические (индикаторные) среды.

Элективные среды (от латинского слова electus – избираю) подобраны таким образом, чтобы обеспечить оптимальные условия для выращивания определённых микроорганизмов. В них могут быть добавлены вещества, избирательно подавляющие развитие сопутствующей микрофлоры. При посеве материала, содержащего смесь различных микроорганизмов, раньше всего проявляется рост того вида, для которого данная среда будет избирательно пригодна.

Сопутствующие микроорганизмы или совсем не растут на таких средах, или развитие их задерживается. Такие среды применяют для выделения микробов определённых видов из объектов, содержащих постороннюю микрофлору.

Например, холерный вибрион может развиваться в присутствии относительно высокой концентрации щелочи(1%), губительно действующей на сопутствующую. Дифтерийная палочка опережает по быстроте роста на свёрнутой кровяной сыворотке Лёффлера сопутствующую микрофлору зева.

Методика посева на искусственные питательные среды

Посев на плотную среду

Если необходимо произвести посев на твердую питательную среду, например на «косой агар», то материал наносят на поверхность среды при помощи легких зигзагообразных движений петли. В том случае, если производят посев анаэробов, делают укол иглой, зараженной микробами, в центральную часть среды, застывшей в виде столбика (рис. 57). Пробирку при этом держат в опрокинутом вверх дном положении или под углом, чтобы уменьшить опасность загрязнения среды из воздуха. Посев нужно делать именно уколом, а не разрывать поверхность среды и не касаться ее рукояткой иглы.

Метод истощающего штриха

В целях экономии сред и посуды можно пользоваться одной чашкой, разделив её на 4 сектора и последовательно засеяв штрихом. Для этого материал берут пет­лёй и проводят ею на расстоянии 5 мм друг от друга ряд параллельных штрихов сна­чала по поверхности первого сектора, а затем последовательно оставшимися на пет­ле клетками засевают все другие секторы. При каждом последующем штрихе про­исходит уменьшение количества засеваемых клеток. После рассева чашки перевора­чивают вверх дном, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке чашки Петри, не мешала получить изолированные колонии. Чашки выдерживают в термостате 1-7 суток, так как скорость роста различных микроорга­низмов неодинакова.

Таким образом, в первых секторах получается сплошной рост, а вдоль после­дующих штрихов вырастают обособленные колонии, представляющие собой потом­ство одной клетки.

Метод прогревания

Позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Прогре­вают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 минут. При этом поги­бают вегетативные формы, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают, образуя колонии только спорообразующих бакте­рий.

Метод обогащения

Исследуемый материал засевают на элективные питательные среды, способст­вующие росту определенного вида микроорганизмов.

Метод Шукевича

Применяется для выделения подвижных микроорганизмов. Исследуемый ма­териал засевают в конденсационную воду скошенного агара, находящегося в про­бирке. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды распространяются по агару, как бы "вползают" на его поверхность. Из верхней час­ти роста производят высев в конденсационную воду свежей питательной среды. Производя таким образом несколько пересевов, в конце концов получают чистую культуру подвижной бактерии.

Метод ингибирования

Основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиоти­ков на микроорганизмы. Определённые вещества угнетают рост одних микроорга­низмов и не оказывают влияния на другие. Например, небольшие концентрации пенициллина задерживают рост грамположительных микроорганизмов и не влияют на грамотрицательные.

Этап 1

А. Забор, транспортировка, хранение, предварительная обработка материала. Иногда до посева проводят селективную обработку материала с учетом свойств выделяемого микроорганизма. Например, перед исследованием мокроты или другого материала на присутствие кислотустойчивых микобактерий туберкулеза, материал обрабатывают растворами кислот или щелочей.

Б. Посев в среду обогащения (при необходимости).Его проводят, если в исследуемом материале содержится малое количество бактерий, например, при выделении гемокультуры. Для этого кровь, взятую на высоте лихорадки в большом объёме (8–10 мл у взрослых, 4–5 мл у детей) засевают в среду в соотношении 1:10 (для преодоления действия бактерицидных факторов крови); посев инкубируют при температуре 37 0 С 18-24 ч.

В. Микроскопия исследуемого материала. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают его по Граму или другим методом и микроскопируют. Оценивают присутствующую микрофлору, ее количество. В ходе дальнейших исследований должны быть выделены микроорганизмы, присутствовавшие в первичном мазке.

Г. Посев на питательные среды с целью получения изолированных колоний. Производят посев материала петлёй или шпателем методом механического разобщения на чашку с дифференциально-диагностической или селективной средой с целью получения изолированных колоний. После посева чашку перевора­чивают дном кверху (чтобы избежать размазывания колоний капельками конденсационной жидкости), подписывают и помещают в термостат при температуре 37 0 С на 18-24 ч.

Этап 2

А. Изучение морфотипов колоний на средах, их микроскопия. Просматривают чашки и отмечают оптимальную питательную среду, скорость роста, характер роста микроорганизмов. Для изучения выбираютизолированные колонии, расположенные по ходу штриха, ближе к центру. Если вырастает несколько типов колоний – каждый исследуется в отдельности. Оценивают признаки колоний (табл. 7). При необходимости чашки с посевамипросматривают через лупу или с помощью микроскопа с объективом малого увеличения и суженной диафрагмой. Изучают тинкториальные свойства отличающихся морфотипов колоний, для этого из части исследуемой колонии готовят мазок, окрашивают по Граму или другими методами, микроскопируют и определяют морфологию чистоту культуры.При необходимости ставят ориентировочную РА на стекле с поливалентными сыворотками.

Б. Накопление чистой культуры. Для накопления чистой культуры изолированные колонии всех морфотипов пересевают в отдельные пробирки со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой и инкубируют в термостате при +37 0 С (такая температура оптимальна для большинства микроорганизмов, но может быть и другой, например, для Campylobacterium spp. – +42 0 C, Candida spp. и Yersinia pestis – +25 0 C).

В качестве среды накопления для энтеробактерий обычно используют среду Клиглера.

Состав среды Клиглера: МПА, 0,1% глюкозы, 1% лактозы, реактив на сероводород (сернокислое железо + тиосульфат натрия + сульфит натрия), индикатор феноловый красный. Изначальный цвет среды малиново-красный, среда «скошена» в пробирках: имеет столбик (2/3) и скошенную поверхность (1/3).

Посев в среду Клиглера производится штрихом по поверхности и уколом в столбик.

Этап 3.

А. Учет роста на среде накопления, оценка чистоты культуры в мазке по Граму.Отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нём в разных полях зрения обнару­живаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Однако в случае выраженного плеоморфизма, присущего неко­торым видам бактерий, в мазках из чистой культуры могут встречаться одновременно клетки с различной морфологией.

Если в качестве среды накопления использовали индикаторную среду Клиглера, то оценивают изменения ее цвета в столбике и скошенной части, по которым определяют биохимические свойства: ферментацию глюкозы, лактозы и продукцию сероводорода. При разложении лактозы желтеет скошенная часть среды, при разложении глюкозы – желтеет столбик. При образовании CO 2 в процессе разложения сахаров образуются газовые пузырьки или разрыв столбика. В случае продукции сероводорода отмечается почернение по ходу укола из-за превращении сульфата железа в сульфид железа.

Характер изменения цвета среды Клиглера (рис. 23) объясняется неодинаковой интенсивностью расщепления микроорганизмами азотистых веществ и образования щелочных продуктов в аэробных (на скошенной поверхности) и анаэробных (в столбике) условиях.

В аэробных условиях на скошенной поверхности происходит более интенсивное щелочеобразование, чем в столбике среды. Поэтому при разложении глюкозы, присутствующей в среде в небольшом количестве, образующаяся на скошенной поверхности кислота быстро нейтрализуется. В то же время при разложении лактозы, присутствующей в среде в высокой концентрации, щелочные продукты не способны нейтрализовать кислоту.

В анаэробных условиях в столбике щелочные продукты образуются в ничтожном количестве, поэтому здесь выявляется ферментация глюкозы.

Б. Окончательная идентификация чистой культуры (определение систематического положения выделенного микроорганизма до уровня вида или варианта) и определение спектра чувствительности выделенной культуры к антибиотикам.

Для идентификации чистой культуры на этом этапе изучают биохимические, генетические, серологические и биологические признаки.

Методы окраски

Механизм и этапы окраски по Граму

1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин снять ее, а краситель слить.

2. Нанести раствор люголя на 1-2 мин (йод)

3. Обесцветить этиловым спиртом в течении 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.

4. Промыть водой

5. Докрасить водным р-ом фуксина в течении 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.

* Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

1. Подбор красителя.

2. Тест на восприимчивость препарата.

3. Предварительное мытье.

4. Нанесение красителя.

5. Время выдержки.

6. Смывание красителя.

7. Уход за окрашенными волосами.

1. Подбор красителя зависит от состояния волос, степени их повреждения.

2. Тест на восприимчивость препарата к данному виду красителя выполняется с внутренней стороны изгиба руки или за ушной раковиной. Для этого наносится небольшое количество препарата на сухую кожу. Если через 24 часа кожа не покраснела, значит она воспринимает препарат.

3. Перед окраской волос 1-й и 2-й групп их не моют. Если волосы перед окраской все-таки излишне загрязнены, можно вымыть их один раз, не затрагивая кожу, чтобы не повредить ее естественную защиту.

4. Нанесение красителя. Перед тем как приступить к окраске волос, необходимо соблюдать правила техники безопасности с препаратами для окраски волос: защитить одежду пеньюаром, работать в перчатках, инструменты не должны иметь металлических частей, так как при взаимодействии красителя с металлом появляются нежелательные металлические соединения, отрицательно действующие на волосы и на качество красителя.

Кожу по краевой линии роста волос необходимо смазать защитным кремом – это предохранит ее от раздражения и от окрашивания красителем. Смешивать краску следует перед самым употреблением, так как процесс окисления начинается сразу же при смешивании и интенсивность цвета ослабевает.

Рис. 134. Нанесение красителя

5. Время выдержки. Очень важно соблюдать время выдержки. Его отсчет начинается после полного нанесения красителя. При нормальной окраске окислительным красителем воздействие должно быть не менее 30 минут, при осветлении – не менее 50 минут, в противном случае краситель не проявится полностью и не будет устойчив на волосах.

Дополнительное тепло применяется при использовании не всех красителей и никогда не используется при тонировании пастельными оттенками.

Рис. 135. Использование дополнительного тепла уменьшает время окраски

За счет использования дополнительного тепла время выдержки уменьшается на 1/3.

Особой осторожности требует окраска волос, подвергшихся химической завивке. Они более пористые и поэтому очень быстро усваивают краситель. Окрашивать их следует через неделю после завивки, а процесс окрашивания сократить на 5-10 минут.

Рис. 136. Перед смыванием красителя нужно вспенить его в небольшом количестве воды

6. Смывание красителя. Перед смыванием красителя с волос необходимо произвести контроль, чтобы убедиться в однородности цвета корней волос и концов. Для этого нужно сдвинуть обушком расчески краску с корневой части, затем с концов и сравнить их. Так же производится контроль за участками седых волос, и если обнаружится, что седина еще не прокрасилась, время выдержки красителя следует удлинить.

7. Уход за окрашенными волосами. После окраски нужно обязательно дать клиенту рекомендации по правильному уходу за окрашенными волосами, иначе краска может быстро смыться и поблекнуть, и клиент ошибочно припишет это плохой работе парикмахера или низкому качеству красителя.

Окрашивание волос включает в себя следующие этапы Гутыря Л.Г. Парикмахерское мастерство - М., 2009:

• - подбор красителя;
• - тест на восприимчивость красителя;
• - подготовка к окрашиванию;
• - нанесение краски;
• - выдержка;
• - смывание краски.

Подбор красителя.

Чтобы определить свой тип волос, необходимо приподнять пряди и рассмотреть их при дневном освещении, поскольку в общей массе волосы кажутся более темными.

После химической завивки обычно применяют тонирующие препараты. Они не только делают цвет более ярким, но и улучшают структуру волос.

При окрашивании в натуральный цвет следует учитывать ряд правил: волосы у корней всегда должны быть темнее, чем на концах, волосы спереди необходимо сделать светлее, чем сзади, а верхние - чуть светлее нижних.

Тест на восприимчивость препарата.

Если есть склонность к аллергии, необходимо провести тест на восприимчивость к данному типу красителя следующим образом:

• - небольшое количество препарата наносят на кожу за ухом;
• - краситель оставляют на 24 часа;
• - если кожа покраснела или появилось раздражение, значит, от препарата следует отказаться.

Подготовка к окрашиванию.

Перед окрашиванием голову не следует мыть, чтобы сохранилась жировая прослойка, которая предохраняет волосы и кожу головы. Очень грязные волосы следует вымыть один раз шампунем без бальзама. Остатки средств для укладки лучше удалить с помощью расчесывания.

Правила нанесения краски.

Правило 1. Кожа лица.

Кожу по краям волос смазывают жирным кремом, маслом или вазелином.

Правило 2. Перчатки.

При окрашивании используют специальные перчатки, поскольку краска неблагоприятно воздействует на кожу рук и ногти.

Правило 3. Инструменты.

Мисочки для разведения краски, а также инструменты для нанесения препарата, должны быть пластмассовые или керамическими, поскольку при реакции красителя с металлом образуются соединения, которые отрицательно влияют на волосы и качество краски.

Правило 4. Смешивание краски.

Краску смешивают непосредственно перед ее нанесением.

Правило 5. Нанесение краски.

Волосы деля на 4 зоны, проводя через макушку два перпендикулярных пробора. Краситель сначала наносят по проборам, а затем на затылочную зону, так как она холоднее, и окраска будет происходить менее интенсивно. На виски и волосы надо лбом, краску наносят в последнюю очередь, поскольку там самые тонкие волосы и они быстро ее воспринимают. Если какие-то пряди необходимо сделать светлее, чем другие волосы, сначала наносить краску нужно именно на них.

Правило 6. Нанесение красителя красного тона.

Если производится окраска интенсивными красными тонами, краску наносят на волосы по всей их длине, отступив от корней на 2-3 см. После того как волосы пропитаются, краситель наносят на корни и на кончики.

Правило 7. Время нанесения.

Наносить краску нужно точно и быстро, чтобы цвет получился равномерным. Вся процедура нанесения не должна превышать 10-15 минут.

Правило 8. Толщина прядей.

Чем гуще и толще волосы, тем тоньше должны быть пряди, на которые наносится краска. Тогда она сможет пропитать каждый волос.

Правило 9. Повторное окрашивание.

Если окрашивание производится повторно, смесь следует наносить точно, чтобы она не попала на ранее окрашенные волосы и они не пострадали.

Правило 10. Резиновая шапочка.

На голове после нанесения краски должен образоваться своего рода панцирь, который создаст парниковый эффект и будет препятствовать выходу свободного кислорода. Для этого на голову надевают специальную полиэтиленовую или резиновую шапочку.

Выдержка.

Нужно соблюдать точное время выдержки. Оно отсчитывается после нанесения красителя.

При постельном тонировании - 15 минут.

При нормальной окраске тон в тон или на тон светлее (темнее) - 30-50 минут.

При сильном осветлении - 50 минут, иначе краситель не сможет проявиться полностью на волосах.

Смывание краски.

Перед смыванием красители необходимо проверить, хорошо ли прокрасились волосы. Для этого обушком расчески отодвигают краску на корнях и концах волос и сравнивают их.

Когда достигается нужный цвет, необходимо провести эмульгацию. Для этого на волосы наносят небольшое количество теплой воды, слегка вспенивают ее и распределяют по всей поверхности головы, производя массирующие движения по линии роста волос.

После этого промывают волосы теплой водой, затем шампунем, обрабатывают нейтрализующим бальзамом, чтобы удалить остатки краски.

4) Культивирование бактерий: условия, питательные среды (их классификация по целевому назначению). Принципы работы питательных сред. Культуральные свойства бактерий. Примеры.

6.Методы культивирования облигатных анаэробов. Способы создания бескислородных условий, применяемая аппаратура. Этапы выделения чистых культур облигатных анаэробов.

8 Методы идентификации бактерий, используемые для определения рода, вида. Методы внутривидовой дифференциации бактерий. Практическое применение.

10.Энергетический метаболизм бактерий. Особенности дыхания облигатных аэробов и облигатных анаэробов. Брожение: типы брожения, примеры бактерий.

11. Понятие о стерилизации и дезинфекции. Методы термической стерилизации, их характеристика, применяемая аппаратура. Приведите примеры стерилизуемых материалов, инструментов.

16.Множественная лекарственная устойчивость. Блрс(бета-лактамазы расширенного спектра).Пути преодоления(ингибиторы бета-лактамаз,примеры защищ.Пенициллинов и цефалоспоринов.

Вопрос 1

2. Бактериофаги. Распространение фагов в природе. Умеренные бактериофаги, особенности их взаимодействия с клеткой. Лизогения, ее значение. Фаговая конверсия.

3.Отличительные свойства бактериофагов как представителей царства Vira. Вирулентные фаги, стадии взаимодействия с бактериальной клеткой. Практическое применение бактериофагов

5.Генотип и фенотип бактерий. Понятие о гене. Современное представление о генетическом аппарате бактерий. Бактериальная хромосома и плазмиды, транспозоны, Is-элементы.

7. Мутации у бактерий. Характеристика типов мутаций. Спонтанные и индуцированные мутации, механизмы возникновения, значение мутаций

Вопрос 1. Микрофлора тела человека. Микробные биоценозы. Причины изменения качественно-количественного состава микробиоценозов. Функции. Способы коррекции микробиоценозов

Вопрос 2. Микроэкология человека. Качественно-количественный состав микробиоты толстого кишечника у детей и взрослых, роль в норме и патологии. Функции нормальной микрофлоры

Вопрос 3. Микроэкология тела человека. Формирование микрофлоры новорожденных детей. Влияние механизма родов, типа вскармливания на состав микрофлоры ребенка первого года жизни.

Вопрос 4. Микрофлора отдельных экологических ниш здорового человека: кожи, дыхательных путей, мочеполовых путей. Роль нормальной микрофлоры в жизнедеятельности человека.(см.Выше)

Вопрос 5. Факторы, оказывающие влияние на количественный и видовой состав микрофлоры человека. Современные методы изучения микробиоты. Охарактеризуйте биопрепараты: пробиотики, пребиотики, синбиотики.

4. Врождённый иммунитет(см.Выше). Гуморальные факторы защиты: примеры, биологические свойства, механизмы действия. Значение.

5. Факторы врождённого иммунитета. Система комплемента, пути активации комплемента, биологические функции.

8. Клеточный адаптивный иммунный ответ. Формы проявления. Цитотоксическая реакция т-лимфоцитов: условия возникновения, основные факторы. Динамика реакции иммунного ответа.

11. Инфекционная аллергия. Аллергены. Практическое использование кожных аллергических проб в диагностике инфекционных заболеваний. Примеры. Механизм действия кожно-аллергической реакции IV типа.

12. Антигены: химическая природа и свойства, условия иммуногенности. Антигены бактериальной клетки, их химическая природа, свойства.

13. Антигены бактериальной клетки: локализация, химическая природа. Подразделение антигенов. Групповые, видовые, типовые антигены. Протективные антигены. Суперантигены. Антигенная мимикрия.

19.Серологические реакции, используемые в инфекционной иммунологии. Реакция непрямой гемагглютинации (рнга), ингредиенты, механизм, цель, понятие о титре. Практическое применение.

20.Серологические реакции,используемые в инфекционной иммунологии.Реакция преципитации:ингредиенты сущность постановка. Практическое применение

25.Серологические реакции,применяемые в инфекционной иммунологии.(см.20)Иммуноблотинг, радиоиммунологический анализ:спецефичность,чувствительность,механизмы реакции.Практическое использование.

28. Вакцинация. Эффективность вакцинации. Национальный календарь прививок рф: цель проведения вакцинации детей и подростков, характеристика вакцин.

29. Анатоксины: свойства, принцип получения, единицы измерения. Ассоциированные вакцины, их свойства, примеры. Охарактеризуйте иммунитет, формируемый в результате введения ассоциированных вакцин.

31. Диагностические сыворотки, их подразделение, получение и практическое применение. Моноклональные антитела. Гибридомы, их использование для получения моноклональных антител.

13.Реакция нейтрализации вирусов как один из основных методов,применяемых в диагностике вирусных инфекций.Сущность методы постановки.

14.Методы индикации и идентификации вирусов.Реакция гемагглютинации вирусов (рга) и реакция торможения торможения гемагглютинации,сущность практическое применение.

15.Культуры клеток:применение культур в диагностике вирусных заболеваний.Цитопатическое действие вирусов на клетки,формы проявления цпд,реакция нейтрализации цпд. Практическое применение.

Вопрос 5. Простые и сложные методы окраски. Подразделение сложных методов окраски по назначению. Протравы и дифференцирующие вещества. Метод Грама: сущность, этапы окраски, практическое применение.

Ответ: Простой метод окраски является одноэтапным (1 краситель –анилиновые, фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий в виде растворов или пропитанных бумажек). Окраска 3-5 минут, промывание, высушивание, микроскопия. Можно получить представление о форме, размерах, расположении (но не о деталях строения).

Сложные

Дифференциальные - позволяющие отличить один вид или группу бактерий от других (по Грамму – характер клеточной стенки, метод Циля-Нильсена - кислотоустойчивые).

Протравы - химические и физические вещества, повышающие окрашиваемость микроорганизмов. Уплотняют цитоплазму и делают окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку (раствор Люголя в методе Грама, карболовая кислота в методе Циля-Нильсена)

Дифференцирующие вещества избирательно обесцвечивают одни виды или структуры бактериальных клеток и не обесцвечивают другие

(спирт в методе Грама, серная кислота в методе Циля-Нильсена и Ожешко).

Окраска по Грамму.

цель метода	Выявление грамположительных и грамотрицательных бактерий
основной краситель	карболовый раствор генцианвиолета
протрава	раствор Люголя (после окрашивания)
дифференцирующее вещество
дополнительный краситель	разбавленный карболовый раствор фуксина
	в пламени спиртовки до окрашивания
этапы окраски	Окрасить раствором генцианвиолета 1 мин. (или с бумажкой – 3 мин.); Нанести на мазок раствор Люголя – 1 мин.; Промыть в этаноле 30 сек.; Промыть водой; Окрасить раствором фуксина 1 мин. (или с бумажкой – 5 мин.); Промыть водой; Высушить
сущность метода	Генцианвиолет образует комплекс с тейхоевыми кислотами в присутствии Люголя, который задерживается многослойным пептидогликаном у грамположительных бактерий. При дополнительной окраске фуксином грамотрицательные бактерии приобретают красный цвет.

1. Вопрос 6. Сложные методы окраски, протравы и дифференцирующие вещества. Метод Циля-Нильсена: сущность, этапы окраски, практическое применение.

Ответ: Сложные методы многоэтапные, различные красители, протравы, дифференцирующие вещества. Сложные методы бывают:

Дифференциальные (отличить группы (по Грамму - характер клеточной стенки, метод Циля-Нильсена -кислотоустойчивые).

Предназначенные для выявления различных структур (споры- Ожешки, включения волютина-Нейссера, капсула- Бурри-Гинса).

Протравы - химические и физические вещества, повышающие окрашиваемость микроорганизмов. Уплотняют цитоплазму и делают

окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку (раствор Люголя в методе Грама, карболовая кислота в методе Циля-Нильсена)

Дифференцирующие вещества - вещества избирательно обесцвечивают одни виды или структуры бактериальных клеток и не обесцвечивают другие (спирт в методе Грама, серная кислота в методе Циля-Нильсена и Ожешко).

Метод Циля-Нильсона:

цель метода	Выявление кислотоустойчивых и некислотоустойчивых бактерий
основной краситель	карболовый раствор фуксина
протрава	карболовая кислота (в момент окрашивания)
дифференцирующее вещество	серная кислота
дополнительный краситель	водный раствор метиленового синего
способ фиксации препарата-мазка	в пламени спиртовки в процессе окраски
этапы окраски	Окрашивать карболовым раствором фуксина (фуксин Циля) через фильтровальную бумажку при осторожном нагревании над пламенем спиртовки 3 раза до появления паров белого цвета (1); Промыть в 5% серной кислоте; Промыть водой; Окрасить раствором метиленового синего 1 мин.; Промыть водой; Высушить
сущность метода	При частичном гидролизе клеточной стенки фуксин взаимодействует с миколовыми кислотами и образует комплекс в присутствии фенола. Фенол разрыхляет бактериальную оболочку и краска проникает внутрь клетки. Кислотоустойчивые -красные, некислотоустойчивые - синие

Практическое применение : для диагностики заболеваний (туберкулез)

Вопрос 7. Клеточная стенка бактерий: особенности строения у грамположительных и грамотрицательных бактерий, функции, методы выявления. Особенности строения клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий. L -формы бактерий.

Ответ:

Клеточная стенка. Располагается над ЦПМ.

КС обеспечивает постоянную форму клетки, механическую и осмотическую защиту, взаимосвязь с окружающей средой, несет рецепторы для бактериофагов.

Отдельные соединения в составе КС обладают целым спектром иммунобиологических свойств : участвуют в адгезии, угнетении фагоцитоза, обладают иммуномодулирующей активностью и т.д.

Химический состав и строение клеточной стенки постоянны и являются важным таксономическим признаком.

В зависимости от строения клеточной стенки прокариоты, относящиеся к эубактериям, делятся на две большие группы: грамположительные и грамотрицательные бактерии.

Основа -пептидогликан , обеспечивающий ригидность и эластичность КС.

Структура: N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных между собой посредством гликозидных связей.

К каждому остатку N-ацетилмурамовой кислоты присоединен короткий пептид из 4-5 аминокислот.

Две особенности пептидного хвоста заслуживают внимания: наличие аминокислот в D-форме (неприродная конфигурация) и высокое содержание аминокислот с двумя аминогруппами. Это имеет принципиальное значение для пространственной организации пептидогликана. Обе аминогруппы этих аминокислот могут участвовать в образовании пептидных связей.

У грамположительных эубактерий он составляет основную массу вещества клеточной стенки (от 40 до 90%), у грамотрицательных - содержание пептидогликана значительно меньше (1-10%).

Функции клеточной стенки:

Обусловливает форму клетки.

Защищает клетку от механических повреждений извне и выдерживает значительное внутреннее давление.

Обладает свойством полупроницаемости, поэтому через нее избирательно проникают из среды питательные вещества.

Несет на своей поверхности рецепторы для бактериофагов и различных химических веществ.

Особенности строения КС Гр+

Клеточная стенка грамположительных бактерий достаточно плотно прилегает к ЦПМ.

Пептидные сшивки в пептидогликане обеспечивают его трехмерную пространственную организацию.

Многослойный пептидогликан пронизывают тейхоевые кислоты – полифосфатные соединения на основе рибитола или глицерина.

Тейхоевые кислоты ковалентно могут соединяться с N-ацетилмурамовой кислотой (собственно тейхоевые или стеночные) или с гликолипидом ЦПМ (липотейхоевые).

Свободные гидроксилы фосфорной кислоты придают тейхоевой кислоте свойства полианиона, определяющего поверхностный заряд клетки.

Особенности строения КС Гр-

Пептидогликан образует только тонкий внутренний слой клеточной стенки, неплотно прилегающий к ЦПМ.

У большинства видов пептидогликан образует одно- или двухслойную структуру, характеризующуюся весьма редкими поперечными связями между гетерополимерными цепями.

Снаружи от пептидогликана располагается дополнительный слой клеточной стенки - наружная мембрана. Она состоит из фосфолипидов, типичных для элементарных мембран, белков, липопротеина и липополисахарида (ЛПС).

ЛПС сложного молекулярного строения, занимает около 30-40% поверхности наружной мембраны и является ее важнейшим компонентом.

Методом выявления клеточной стенки является метод Пешкова (КС –красная; цитоплазма –розовая), по Грамму-тип стоения клеточной стенки.

Метод выявления клеточной стенки: Метод Пешкова

Этапы окраски :

1.мазок протравливать в 10% растворе танина 6-8 мин

2.промыть водой

3.окрашивать водным раствором фуксина 30-60 сек

4.высушить

Сущность метода : танин уплотняет клеточную стенку бактерий, и большая часть фуксина задерживается в ней

Цель : выявление клеточной стенки. КС - красная, цитоплазма -розовая

Особенности клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий

Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий содержит большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Для их окраски применяют метод Циля-Нильсена .

L-формы

Если бактерии частично или полностью утратили клеточную стенку, но сохранили способность к размножению, они называются L-формами.

L-формы бактерий образуются под воздействием препаратов, ингибирующих синтез пептидогликана (антибиотик пенициллин) или разрушающих пептидогликан (лизоцим).

Изучают L-формы в фазово-контрастном микроскопе

Воспрос 8. Капсула бактерий: химическая природа, строение, функции, значение. Методы выявления капсул. Примеры инкапсулированных бактерий.

Капсула бактерий располагается поверх клеточной стенки. Она защищает бактериальную клетку во внешней среде от механического повреждения, высыхания, ядовитых веществ, бактериофагов, фагоцитов(в инфицированном организме). Выявление: в мазках-отпечатках из органов зараженных животных(простой метод, метод Грама). Тела бактерий окрашены на фоне окрасившейся ткани органа,окружены белым ореолом капсулы(капсула не окрашивается). Метод Бурри-Гинса (для окраски чистой культуры капсульных бактерий).

Метод выявления капсул: метод Бурри-Гинса

Цель метода : выявление капсулы у бактерий

Этапы окраски :

1.в каплю туши добавить каплю жидкости с микроорганизмами и растереть тонким слоем как мазок крови

2.высушить и зафиксировать в пламени горелки

3.окрасить карболовым фуксином 1мин

4.высушить

Сущность метода : капсула не окрашивается, задерживает тушь на поверхности, а фуксин окрашивает бактериальную клетку

Пример инкапсулированных бактерий : Klebsiella pneumoniae , Bacillus cereus

Воспрос 9. Жгутики у бактерий: строение, типы расположения, функции, способы выявления. Ворсинки: фимбрии, пили, подразделение, строение, функции. Примеры бактерий.

Жгутики являются органами движениями, представляют собой нитевидные придатки,состоят из белка флагеллина; прикрепляется к бакт.клетке с помощью базального тельца(система дисков и крючка, к которому прикреплена жгутиковая нить). Монотрихи (один жгутик),перитрихи (жгутики по всей поверхности бакт клетки), лофотрихи (пучок жгутиков на одном конце клетки), амфитрихи (единичные жгутики или пучки на разных полюсах клетки). Способы выявления: метод серебрения(жгутики искусственно утолщаются и становятся видимыми в иммерсионном микроскопе); наличие жгутиков определяется по активной подвижности микробных клеток.

Ворсинки(фимбрии и пили) состоят из белка пилина, видны только в электронном микросопе(тонкие и короткие). F -пили (половые, обеспечивают конъюгацию междубактериями);фимбрии общего порядка (адгезия).

Примеры бактерий: Половые пили Е. соli

Salmonella Typhi - перитрихи

Vibrio cholerae - монотрихи

Campylobacter jejuni - лофотрихи или амфитрихи

Воспрос 10. Споры бактерий: типы расположения спор в клетке, строение споры. Причины устойчивости спор к воздействию факторов внешней среды. Методы выявления спор. Примеры спорообразующих бактерий.

Эндоспора- являются приспособлением бактерий для сохранения вида в неблагоприятных условиях внешней среды. В одной бактериальной клетке образуется только одна спора! Такой способностью обладают бактерии рода Bacillus и Clostridium . (Bacillus – центральное расположение спор, не превышают поперечник клетки; Clostridium-крупные споры, субтерминально/терминально,в месте нахождения споры клетка раздувается, приобретая веретенообразную форму).Высокая резистентность ,причины: низкое содержание свободной воды, высокое содержание кальция,наличие дипиколиновой кислоты и белка, богатого цистеином,наличие нескольких оболочек). Окрашивание спор-метод Ожешки.(на высушенный мазок наложить фильтовальную бумажку, налить 0,5% раствор соляной кислоты и нагревать над пламенем спиртовки до появления пара 3 раза;далее окрашивать по Цилю- Нильсену.(Вегетативные клетки в готовом мазке-голубого цвета,споры-рубиново-красные).

Воспрос 11. Ультраструктура бактериальной клетки. Строение цитоплазматической мембраны, функции, методы выявления. Особенности строения наружной мембраны грамотрицательных бактерий.

ЦМП-основной барьер,который ограничивает протопласт бактерий,выявляется только в электронном микроскопе;состоит из двойного слоя фосфолипидов,куда включены интегральные и неинтегральные белки;от мембраны эукариот отличается отсутствием стеролов.

Функции : участвует в процессах избирательного активного транспорта молекул из внешней среды, является осмотическим барьером и осмотическим мостиком, выделяет гидролитические ферменты, в ее состав входят ферменты электрнонно-транспортной цепи,с ней связана АТФ-аза, содержит ферменты комплекса репликации ДНК нуклеоида,в ней фиксируются жгутики и ворсинки,имеет ферментный аппарат,участвующий в синтезе своих собственных структур, клеточной стенки.

Мезосомы - инвагинации ЦПМ внутрь клетки. Играют роль в репликации хромосомы и ее последующем расхождении по дочерним клеткам, разграничивает внутреннее содержимое на отсеки. Мезосомы грамотрицательных бактерий-простые инвагинации, грамположительных имеют сложную морфологию (везикулярные,трубчатые,пластинчатые).

Наружная мембрана грамотрицательных бактерий связана посредством липопротеина с подлежащим тонким слоем пептидогликана; внутренний компонент-фосфолипидный бислой, в наружном расположен липополисахарид (является О-антигеном, состоит из: липида А-консервативная структура; ядра, или стержневой, коровой части-олигосахаридная структура; высоковариабельного О-специфического олигосахарида). Белки- порины пронизывают мембрану, образуя гидрофильные поры, также являются рецепторами для бактериофагов.(из учебника)

Воспрос 12. Ультраструктура бактериальной клетки. Рибосомы: строение рибосом у прокариот, функции. Отличия в строении рибосом эукариотических клеток. Цитоплазматические включения у бактерий: химическая природа, функции, способы выявления, значение.

Рибосомы прокариот имеют константу седиментации 70 S. Они построены из двух частиц: 30 S (малая субъединица) и 50 S (большая субъединица). S - это коэффициент седиментации, который характеризует скорость перемещения молекул или частиц в центробежном поле при центрифугировании. Рибосомы рассеяны по всей цитоплазме

В клетке эукариот имеют 80S рибосомы прикреплены к эндоплазматическому ретикулуму. Функция: синтез белков

Включения- зерна волютина,содержащие поли- и мета-фосфаты. (Corynebacterium diphtheria). Окрашиваются простым методом Леффлера(окраска фиксированного в пламени горелки мазка щелочным мителеновым синим 5 мин. Тела бактерий-голубые,зерна волютина- темно-синие ) и сложным методом Нейссера (фиксированный в пламени горелки мазок окрашивают уксусно-кислой синькой в течении 1 минуты,промывают водой,протравливают раствором Люголя 30 скекунд и докрашивают везувином. Препарат промывают водой, высушивают, микроскопируют. Тела бактерий-желтые , зерна волютина- темно-синий цвет , расположены на обоих концах клетки) .

Воспрос 13. Ультраструктура бактериальной клетки. Нуклеоид бактерий: строение, функции и методы выявления. Особенности организации генетического аппарата прокариот и эукариот.

Нуклеоид у прокариот - генетический аппарат бактерий не имеет ядерной оболочки и представлен одной кольцевой двунитевой суперспирализованной молекулой ДНК,которая является хромосомой; располагается в цитоплазме,не содержит белков гистонов. Не способен к митозу

Генетический аппарат всех эукариот находится в ядре и защищён ядерной оболочкой.ДНК эукариот линейная. Хромосомы как структуры. Содержит белки-гистоны. Способен к митозу

Выявляют при электронной микроскопии, Романовского- Гимзы.

метод Романовского-Гимзы

Цель метода : выявление нуклеоида; нуклеоид - сине-фиолетовый; цитоплазма - розовая

Сущность метода : Амур и метиленовый синий окрашивает участки клетки со слабощелочным pH , эозин с кислым

Этапы окраски :

1.провести кислотный гидролиз в растворе соляной кислоты при нагревании

2.промыть водой

3.окрашивать краской Романовского-Гимзы 40-60 мин

4.высушить

14. Актиномицеты : морфология чистой культуры и структура друзы актиномицетов. Методы изучения. Роль в инфекционной патологии человека.

Актиномицеты - группа нитчатых грамположительных прокариот. Виды актиномицет представляют собой тонкие неспорообразующие полиморфные палочки и нити(гифы) с ветвлением; гифы переплетаясь, образуют мицелий.

Актиномицет у здорового человека обитают в полости рта и кишечном тракте, не причиняя ему вреда, но снижение иммунитета организма может вызвать заболевание - актиномикоз (развиваются гнойные хронические процессы с поражением любых органов и тканей).

В пораженном организме актиномицеты образуют друзы , имеющие звездчатую, лучистую форму. Центр друзы состоит из компактного кальцинированного плотного мицелия, а периферийные гифы покрыты капсулоподобными эозинофильными чехлами, выполняющими защитную функцию.

Для изучения актиномицет применяют методы Грама и Циля-Нильсена

15. Микоплазмы : таксономия, строение клетки, особенности морфологии, биологические свойства, методы культивирования и выявления. Роль в инфекционной патологии человека.

Ответ : Класс - Mollicutes

Порядок - Mycoplasmatales

Семейство - Mycoplasmataceae

Род - Mycoplasma

Микоплазмы - полиморфные микроорганизмы, отличающиеся от других прокариотов отсутствием клеточной стенки

Поверхностной оболочкой микоплазм является цитоплазматическая мембрана, более прочная и эластичная (т.к. в ней присутствует холестерин). Клетки микоплазм содержат нуклеоид(самый маленький), рибосомы, цитоплазму и цпм (без мезосом). У некоторых микоплазм обнаружены микроворсинки (Mycoplasma pneumoniae) и нитчатые выросты различной длины, которые принимают участие в скользящем движении клеток и адгезии.

Для культивирования микоплазм используют специальные полужидкие среды , на которых через 2-4 недели получают видимый рост в виде колоний, напоминающий "яичницу- глазунью"(из-за хрупкости микоплазм - т.к. Отсутствует клеточная стенка).Их изучают в нативных препаратах в фазово-контрастном микроскопе (не удается окрасить из-за хрупкости)

16. Риккетсии : таксономия, биологические свойства, морфологические формы, методы окраски, методы культивирования. Жизненный цикл риккетсий. Роль риккетсий в патологии человека (назовите заболевания и соответствующих им возбудителей).

Ответ : Царство - Bacteria

Порядок - Rickettsiales

Семейство - Rickettsiaceae

Род - Rickettsia

Риккетсии - грамотрицательные полиморфные бактериоподобные прокариоты,капсул,спор не образуют. Облигатные внутриклеточные бактерии, которые не растут на простых питательных средах. Жизненный цикл риккетсий включет 2 стадии - вегетативную и покоящуюся . В вегетативной стадии риккетсии активно размножаются путем бинарного деления; покоящаяся форма обладает повышенной резистентностью(меньших размеров, с утолщенной клеточной стенкой).

Различают 4 морфологические формы риккетсий (по Здродовскому ) :

Кокковидную (d= 0,3-0,4мкм)

Палочкивидную (1-2 мкм)

Бациллярную(3-5 мкм)

Нитевидную(до 40 мкм)

Риккетсии культивируются в желточных мешках куриных эмбрионов, перевиваемых культурах клеток, легких белых мышей. Риккетсии можно культивировать путем инфицирования ими переносчиков возбудителей инфекций - вшей, блох, клещей. Для окраски риккетсий применяют сложные методы - Романовского-Гимзы и Здродовкого

Методика окраски :

1.фиксированный в пламени горелки мазок окрашивают разведенным карболовым фуксином Циля(без нагревания)

2.промывают водой

3.обесцвечивают слабым раствором органической 0,5% лимонной к-ты, 0,15% уксусной к-ты или минеральной кислоты (0,01% HCL)

4.промывают водой и докрашивают водным раствором метиленового синего

Результат окраски : риккетсии - в рубиново-красный; цитоплазма - голубая; ядро - синее

Патогенные для человека риккетсии являются возбудители риккетсиозов, для которых характерны сыпнотифозные или пятнистые лихорадки. Например, Rickettsia prowazekii вызывает эпидемический вшивый сыпной тиф.

17. Хламидии : таксономия, морфология и ультраструктура, жизненный цикл. Методы выявления и культивирования. Роль в инфекционной патологии человека.

Ответ : Семейство - Chlamydiaceae

Род - Chlamydia

ЭТ - внеклеточная инфекционная частица (0,2-0,4 мкм), содержит компактный нуклеоид, рибосомы, жесткую клеточную стенку. ЭТ проникает в чувствительную клетку путем эндоцитоза, вокруг него образуется вакуоль. Внутри вакуоли ЭТ разбухает, приобретает сетчатую структуру, увеличивается до 0,5-1,5 мкм и превращается в РТ.

РТ внутри вакуоли многократно делится путем образование поперечных перегородок. Вакуоль заполняется микро-колониями хламидий, содержащих большое количество РТ в процессе деления, промежуточные тельца и ЭТ. Вакуоль превращается во внутриклеточное включение, покрытое оболочкой - хламидой, расположенное в цитоплазме клетки-хозяина. Выход хламидий из клетки - через неповрежденную мембрану или при гибели клетки. Освободившиеся ЭТ внедряются в другие здоровые клетки, где цикл развития повторяется.

Изучают хламидии в живом состоянии, в фазово-контрастном микроскопе и окрашивают методом Романовского-Гимзы (ЭТ - розовые, РТ - сине-голубые).

Патогенны: Chlamydia trachomatis (трахома и урогенитальные инфекции), Chlamydia pneumoniae (респираторные инфекции), Chlamydia psittaci (орнитоз).

18. Спирохеты : таксономия, биологические свойства, ультраструктура клетки, цисты. Методы изучения спирохет нативных и окрашенных препаратов. Роль спирохет в инфекционной патологии человека.

Семейство – Spirochaetaceae

Спирохеты - тонкие нитевидные, спирально извитые микроорганизмы, обладающие активной подвижностью. Относятся к грамотрицательным прокариотам. Клеточная стенка эластичная, что позволяет им совершать колебательные, вращательные и сгибательные движения.

Двигательный аппарат представляет собой фибриллярный тяж, состоящий из 2х пучков фибрилл, расположенных субтерминально на обоих концах клетки. Фибриллы пролегают в клеточной стенке, обвивая цитоплазматический цилиндр (протопласт). В середине клетки фибриллы перекрывают друг друга. Фибриллы состоят из белка флагеллина.

Спирохеты изучают в нативных препаратах, используя темно-польную микроскопию для выявления их форм и подвижности. Их Ультраструктуру изучают с помощью электронной микроскопии. Для изучения спирохет в окрашенном состоянии применяют: метод Романовского-Гимзы (боррелии в сине-фиолетовый, трепонемы в бледно-розовый, лептоспиры в красно-розовый), метод серебрения по Морозову (спирохеты имеют вид тесно-коричневых спиралей на светло-желтом фоне препарате),негативный способ Бурри (тушь не проникает тела микробов,на темном фоне белые контуры спирохет)

существенную роль в инфекционной патологии человека играют роды Treponema, Borrelia и Leptospira. Treponema pallidum - возбудитель сифилиса, Borrelia recurrentis - возбудитель возвратного тифа, Leptospira interrogans является возбудителем лептоспироза

19. Микроскопические грибы : морфология, ультраструктура. Размножение плесневых и дрожжевых грибов. Методы изучения. Роль в инфекционной патологии человека.

Протопласты (содержимое клетки, заключенное в клеточную стенку) клетки грибов содержат ядро с ядрышком, митохондрии, лизосомы, эндоплазматический ретикулум, рибосомы, фагосомы, вакуоли и др. Снаружи протопласты покрыты ЦПМ с высоким содержанием стеролов (главным образом эргостерола) и плотной клеточной стенкой,в состав которой входят хитин, целлюлоза, глюкуроновая кислота, глюканы, различные углеводы, липиды, белки, пигменты.

По морфологическим особенностям грибы подразделяются на группы: плесневые грибы и дрожжеподобные грибы

Плесневые грибы образуют мицелий (тело гриба), который состоит из переплетенных гифов. На питательной среде плесневые грибы образуют субстратный мицелий, который прорастает в нее, извлекая из среды все необходимые для роста и размножения вещества, и воздушный мицелий,на котором созревают неполовые споры,с помощью которых грибы размножаются. Бесполовой путь у плесневых грибов характеризуется образованием большого количества экзоспор или эндоспор. Многие грибы могут размножаться и половыми спорами(половым путем).

Дрожжевые грибы размножаются почкованием.

Морфологию грибов изучают в нативных препаратах "раздавленная капля" в затемненном поле зрения, фазово-контрастном и люминесцентном микроскопе и с помощью окраски простым методом, по Граму, Цилю-Нильсену,Нейссеру

Заболевания вызываемые микроскопическими грибами - микозы.Грибковое заболевание Кандидоз - вызывается Candida albicans

РАЗДЕЛ ФИЗИОЛОГИЯ.